elisa原理及方法（你需要搞定这些）

ELISA是蛋白定量的金标准，也是免疫学研究中最常用的实验方法之一。很多人觉得ELISA很简单，其实不然。江莱生物带你绕开ELISA实验中出现的各种问题，轻松搞定ELISA实验。

酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，简写ELISA）指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法，分为三种方法，夹心法、竞争法、间接法，最常用的就是夹心法。

ELISA夹心法原理示意图

如何选择合适的ELISA试剂盒？

1、知道所需要品牌试剂盒的命名规则，如江莱生物的命名规则是：种属-检测指标-英文简称-ELISA检测试剂盒

① 样本的来源种属，首先要确定您的样品是一个来自哪里，然后选择对应的试剂盒种属

② 需要检测样本中的哪个指标

2、待测因子的表达水平（对应检测限的高低，表达水平较高的可以选择普通的kit，如果表达水平过低，已经落在盒子的检测限之外，可以考虑选择定制高灵敏的盒子，有更低的检测下限）

3、仪器——最关键是需要有酶标仪，检测波长需要450nm

ELISA操作流程（夹心法）

ELISA夹心法操作流程

实验注意事项

1、每一个不同的试剂盒都要重新检测标准品，做标曲，否则会有较大误差。

2、每次洗涤的步骤都要洗干净，如果是手动洗涤，每次拍板用的滤纸都要更换，防止交叉污染。

3、加样量要完全精准，使用洗液枪枪头不能有多余液滴残留，会导致加样量偏多。

4、孵育样品、检测抗体和显色底物均需要覆盖封板膜，减少污染和挥发，且每次使用后都要更换新的封板膜，防止交叉污染。

5、血清样本取样时要注意，避免溶血、脂血等样本。如样本条件受限，建议用样本稀释液适当稀释，减少基质效应影响。

6、实验之前将微孔板和试剂在室温下平衡；不要将微孔板置于温度变化太大的地方（如阳光直射、通风处等）；可用铝箔包住微孔板底部及下部外沿降低边缘效应和漂移；不使用边缘的孔。综上所述以尽量减少边缘效应。

7、ELISA数据处理有专门的软件，并且要核对说明书选择合适的拟合曲线。

ELISA是一种广泛应用于大分子蛋白和小分子激素定量检测的免疫诊断技术。合适的样本预处理、优质的仪器＆试剂、正确的实验操作，是保证ELISA实验结果准确可靠的必要条件。